תוֹכֶן
כרומטוגרפיה נוזלית עם ביצועים גבוהים (HPLC) היא כלי המשמש להפרדת חומרים מתערובת. ההפרדה והזיהוי של כימיקלים מסוימים מתרחשים בעיקר בעמוד הכרומטוגרפי של המערכת. סוגי עמודות רבים זמינים עבור CLAE, וכל אחד מהם משמש לסוג ניתוח ספציפי. העמודה C18 היא החזקה ביותר שאינה קוטבית. לאחר שימוש מתמשך לפרק זמן ממושך, קצב זרימת הממיס דרכו פוחת וזמן הניתוח גדל. גורם נוסף לירידה בזמן הניתוח הוא שיש דגימות שמשאירות כמויות קטנות של כימיקלים בחומר העמודה, מה שמקטין את היכולת להפריד ביניהן. ניתן לבצע את שחזור פני השטח על ידי טיפול בחומר בסדרת ממסים ספציפיים כדי לנקותו מכל הדגימות שנותרו ולהחיות את החומר התומך.
שלב 1
הסר את העמודה C18 מכיוון הזרימה והנח אותה בכיוון ההפוך. החזרת הממס דרכו תקל על אפקט ההצטברות המתרחש לאורך זמן. יש להיזהר שלא להשאיר יותר מדי חומר שנצבר בסוף הטור. ישנם מפעלים שמשתמשים ברשת גדולה יותר בחלק העליון, כך שכאשר הזרימה משנה כיוון, הרשת נמצאת במצב שמתחת. שיטת שחזור זו נקראת היפוך זרימה. כדי למנוע הצטברות של זרימה לגלאי המערכת ואולי לגרום לחסימה, אפשר לו לתפקד מבלי שהגלאי מחובר וכוון את הזרימה מהעמוד לסילוק.
שלב 2
מניחים את צינור המעבר של הממס בסדרה של ממסים כדי לחמם כל תרכובת שנשמרת בעמודה בכיוון ההפוך. ממיסים אלה משתנים במאפייניהם ההידרופיליים. על ידי שינוי אותם, תוכלו לחמם תרכובות בעלות אופי הידרופילי מגוון באותה מידה. השתמשו ב- 50 מ"ל מכל אחד מהממיסים הבאים, ברצף: מים (אם אתם משתמשים במאגר), מתנול, איזופרופנול, דיכלורומתאן, הקסאן, דיכלורומטן ואיזופרופנול.
שלב 3
החלף את העמודה בכיוון הנכון וגרם לממיס שלך לזרום דרכו. השתמש בכביסה 75 מ"ל לפחות כדי לשטוף אותו לפני שתמשיך. בדקו אותו בעזרת תבנית בה השתמשתם כשהיה חדש ובדקו את התוצאות. שימו לב כאשר מגיעים לנקודות השמירה המרביות ולזמן הניתוח הכולל. המידה שבה תכונות אלה תואמות את המבחן הראשוני כשהיא עדיין הייתה חדשה תציין את המידה בה שוחזרה העמודה. אם התוצאות אינן מספקות, החלף את העמודה בעמדה חדשה והשליך את הישן.
