תוֹכֶן

• הוראות
• מחזיר את העמודה
• איך
• שים לב
• מה שאתה צריך

ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC) היא שיטה נפוצה של ניתוח מעבדה שבו מדגם מופרד רכיבים כימיים שלה כפי שהוא עובר דרך עמודה. עמודה זו מלאה בחומר נקבובי, בדרך כלל ג'ל סיליקה. עמודה הפוכה סטנדרטי, כמו C8, יכול לפעמים לסתום או להיות מזוהמים. עמודות אלה ניתן לאחזר באמצעות טכניקות פשוטות מאוד.

הוראות

הממס הנכון יכול לשחזר עמוד מלוכלך (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

מחזיר את העמודה

1. לנתק את העמודה לאחור את המיקום שלה, כך בשלב הנייד נכנס עכשיו דרך מה הוא בדרך כלל את הפלט של העמודה. צרף שקע לקצה השני של הטור (שהיה הערך המקורי), ולתת לו לנקז לתוך פריקה.

2. משאבה סדרה של ממיסים על מנת של הקטנת הקוטביות. הסדרה הבסיסית המומלצת היא להתחיל עם מתנול, ולאחר מכן לעבור אצטוניטריל, אז אצטוניטריל / איזופרונול (75:25), איזופרונול, מתילן כלוריד ו הקסאן. אם השלב הנייד שהיה בעמודה היה סופג, מומלץ לעבור עם מים לפני מתנול. זרימה של 1-2 מיליליטר לדקה מספיקה, ועל כעשרה עמודות נפח של כל ממס צריך להיות שאוב. עמודת עוצמת הקול היא המרחב הפנימי של העמוד, ומחושבת על ידי (0.7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), כאשר DI הוא הקוטר הפנימי של העמודה ו- L הוא אורך.

3. משאבה עוד עשרה כרכים של איזופרונול דרך העמוד כדי להכין אותו לשימוש עם השלב הנייד המקורי. אם השלב הנייד המקורי כבר מרופד, גם לשאוב מים דרך הטור לאחר האיזופרונול, לפני שחזר לשלב הנייד המקורי.

   
   

4. לנתק את הטור, להפוך אותו ולעסוק שוב, כך שהוא נמצא במקומו המקורי (כך בשלב ניידת מזין את הצד הימני של העמודה). חבר את יציאת הרמקול לגלאי.

איך

• אם תהליך זה אינו נקי לחלוטין את הטור, תערובת 50:50 של dimethyl sulfoxide (DMSO) ו dimethyl formamide (DMF) עשוי לשמש. שאריות של חלבונים ויונים ממתכת עשויים לדרוש סוגים אחרים של ממיסים, כגון ריאגנטים חוסכי יונים או תמיסה של אתילן דיאמין חומצה טטרה-אצטית (EDTA).

שים לב

• במכשירים מסוימים, בעמוד השדרה תהיה מסננת מתכת מחוספס כמו מפרצון. במקרה זה, ביטול העמודה יאפשר לשלב נייח לעזוב את העמודה, וזה לא מומלץ. התייעץ עם הסוחר שלך אם אינך בטוח.
• הממס המשמש בתהליך זה הוא רעיל פוטנציאלי כאשר לבלוע ושאף. השתמש באמצעי זהירות רגילים בעת הטיפול.

מה שאתה צריך

• התקן HPLC
• מים
• מתנול
• אצטוניטריל
• איזופרונול
• מתילן כלורי
• הקסאן